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    巴氏染色液如何快速染色?

    日期:2019-09-17瀏覽:2082次

            巴氏染色液的巴氏染色法是病理切片和脫落細胞染色中較好的較常用的染色方法,該染色法不但具有顯示細胞核結構清晰,分色明顯,透明度好,胞漿受色鮮艷等特點,而且所染標本不易脫色,可長久保存。細胞核的主要成分是脫氧核糖核酸,其等電點為pH 1.6-2.0,當pH大于2.0時DNA帶負電,能與帶正電的染料陽離子結合。蘇木素是染核的染料,氧化后成為氧化蘇木素即蘇木素紅或蘇木精,它的等離子點是PH 6.5,當染液的酸堿度調節到PH 2.2-2.9時,蘇木精能析出陽離子,與帶負電的DNA結合。因為蘇木精陽離子電荷不強,與DNA結合不牢,所以染色不深。當加入鉀礬等媒劑后,即結合成帶強正電的大分子帶色體——蘇木精礬,后者具有強大親和力,與DNA結合牢固,染成較深紫色,不易為醇、水洗脫。細胞漿中的蛋白質等電點約為PH 6.0,在不同的酸堿度中能與不同的染料結合。但在PH小于4時便不能再與染料的陽離子結合;PH大于8時便不再與染料的陰離子結合。伊紅、亮綠、桔黃、俾士麥棕的發色部分都是陰離子,只能與蛋白質的陽離子結合,因此染色環境不能太酸太堿。較年輕的細胞如底層鱗狀上皮細胞漿中核蛋白體較多,易與亮綠結合而染綠色。成熟的細胞漿中含核蛋白體較少(如成熟紅細胞、表層角化鱗狀上皮細胞)易與伊紅結合而染紅色。很衰老的細胞(如完全角化細胞)則可與桔黃結合而呈桔黃色。
      巴氏染色液快速染色的具體實施方式:
      本實施例巴氏染色液是由細胞核染色液和細胞漿染色液構成;
      1.細胞核染色液的配制:
      2.將0.3g蘇木素色精單獨溶解于30ml無水乙醇中得蘇木素酒精液;將硫酸鋁銨6g置于1000ml大燒杯中加蒸餾水700ml,加熱至70-80℃,攪拌使其完全溶解,然后加溫至
      90℃,關斷熱源即加入蘇木素酒精液,邊加邊攪拌,加完之后繼續加熱至沸即離開熱源;再向其中加入0.5g黃色HgO粉末,邊加邊攪拌,繼續加熱使溶液經目測呈深紫色,立即置于10-30℃的水中進行水浴冷卻;冷卻到10-30℃后置于塑料桶中,加入體積百分比為1%冰乙酸2ml,經濾紙濾去殘渣即得細胞核染色液,避光保存;冰乙酸的加入能穩定蘇木素染色團抗拒氧化,使不過染,也減少沉淀形成;
      3.細胞漿染色液的配制:
      4.取0.1g橙黃G6溶于100ml、體積百分比為95%的酒精得橙黃G6酒精液為備用料;
      5.取0.1g亮綠溶于100ml、體積百分比為95%的酒精得亮綠酒精液為備用料;
      6.取0.05g俾仕麥棕溶于100ml、體積百分比為95%的酒精得俾仕麥棕酒精液為備用料;
      7.取0.1g伊紅溶于100ml、體積百分比為95%的酒精得伊紅酒精液為備用料;
      8.取磷鎢酸0.5g為備用料;
      9.所有備用料充分混勻溶解后即為細胞漿染色液。
      10.利用以上過程制備的巴氏染色液的快速染色方法是在22℃的室溫環境下按如下步驟進行操作:
      a、固定:將未干的宮頸分泌物涂片置體積百分比為95%的酒精中,15-30分鐘時取出得固定涂片;
      b、染核:將步驟a所得固定涂片置于細胞核染色液中染色2分鐘,取出后用蒸餾水沖凈得染核涂片,立即進行下一步驟的染漿;
      c、染漿:將染核涂片置于細胞漿染色液中,2分鐘取出,先后在兩缸體積百分比為95%的酒精液中洗滌至無細胞漿染色液附著即得染漿涂片,染漿涂片即可用于進行鏡檢;
      若需要長期保存則繼續進行后續步驟d的封片;
      d、封片:將步驟c所得染漿涂片置于無水酒精中洗滌后,再先后置于兩缸AR級二甲苯洗滌透明涂片;用阿拉伯樹膠封固透明涂片,被封固的透明涂片在10-30℃避光條件下保存。

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